河北食品网--河北省食品工业协会

在日常工作中，在测定水源水（地表水）时，测定原水时，酶底物法测定菌落总数的结果最大范围为 73 8MPN/mL ,酶底物定量盘法测定结果最大为2419.6 MPN/mL，测定范围远超过酶底物法；在包装饮用水过程控制中，目前国标方法中取样量均为1mL，1mL样品往往代表性不够，而酶底物定量盘法取样量为100mL，相对于其它方法，对生产过程控制的指导性更科学一些；酶底物法测定菌落总数共有83个准确数据，而在相同范围内（＜738 MPN），酶底物定量盘法共有2330个数据，相对与酶底物法，酶底物-定量盘法的数据会更精准一点。

根据以上工作情况，特向河北省食品工业协会提出了团体标准《定量盘法测定水中菌落总数》的立项申请。

2026年1月，根据河北省食品工业协会关于批准《定量盘法测定水中菌落总数》的团体标准立项计划的通知（冀食协[2026]4号）要求，河北天工水韵环境检测技术有限公司组织开展《定量盘法测定水中菌落总数》标准制定工作，项目统一编号为：T/HBFIA-JH2026001。

（二）起草单位和起草人

本文件起草单位:河北天工水韵环境检测技术有限公司、中国南水北调中线河北分公司、温州市自来水有限公司、唐山市润质检测技术服务有限公司、

重庆城市供水水质监测网重庆中法供水水质监测站、石家庄市环境监控中心、

河北金泓检测技术有限公司、石家庄市城市排水监测站、河北工业职业技术大学、河北先达环保科技有限公司。

本文件主要起草人：林孔亮、马聪士、王君林、赵莎、苏丹、韩晓东、

（三）任务分工

任务分工见下表。

主要单位	承担的工作
河北天工水韵环境检测技术有限公司	项目负责人，负责项目申请立项、整体构思、编制思路及整体定位、项目技术把控及项目的整体组织和推进等。
中国南水北调集团中线有限公司河北水质监测中心河北工业职业技术大学	用 SET 2020 软件对标准文档进行编辑；按 GB/T 1.1—2020要求对标准文本进行修改与撰写；按专家提出的意见修改标准文本；汇总和撰写编制说明，汇总征求意见，撰写标准解读、上报函等技术资料。
温州市自来水有限公司	负责标准的研制工作：包括研制实验以及方法文本、研制报告、编制说明的撰写并征集意见等工作。
唐山市润质检测技术服务有限公司重庆城市供水水质监测网重庆中法供水水质监测站石家庄市环境监控中心河北金泓检测技术有限公司石家庄市城市排水监测站河北先达环保科技有限公司河北诚乾建设有限公司石家庄高新技术产业开发区住房建设和城市管理局	负责标准的验证工作：包括验证实验、验证报告的撰写工作。

（四）主要工作过程

1.2025年8月至12月，通过资料查询，了解国内外菌落总数的标准检验方法，综合考虑我国经济技术可行性、标准的先进性及与国家标准、国际标准的可比性，确定方法研制的技术路线，进行方法研制的前期准备工作。

2.2026年1月，向河北省食品工业协会,提出起草团体标准申请。获批后购置方法研制所需的培养基、试剂、耗材等。

3.2026年2月召开《定量盘法测定水中菌落总数》标准制定开题论证会，从试剂的选择、使用要求、实验条件的选择等方面开展实验研究。经过专家论证,顺利通过标准开题论证报告和标准草案，确定标准制定的原则和主要内容的依据，同时确定相关实验室进行方法验证，进行标准后续完善和论证。

4.2026年3月至4月，进行方法验证。整理实验结果，形成方法的初稿。

三、采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况

《酶底物-定量盘法测定菌落总数》方法目前在国内外尚无认证的标准，但查阅文献可知，国内已有定量盘(HPC for Quanti-Tray)和传统平皿计数法比较的相关研究，该研究表明，采用酶底物-定量盘法 (HPC for Quanti-Tray)与平皿计数法对水中菌落总数进行检测。比较结果显示,两种方法具有相关性,且没有统计学意义上的显著性差异。采用酶底物-定量盘测定水中菌落总数具有测定范围广、取样量大、测量精度高等，可以采用与总大肠菌群酶底物法检测同样的试验平台等优点,满足了实验室检测水中菌落总数的要求。选取目前常用的酶底物法和酶底物-定量盘法进行比较（见表1）

表1酶底物法和酶底物-定量盘法方法比对

	酶底物法	酶底物-定量盘法
最高测定浓度（MPN/mL）	738	2419.6
最大取样量（mL）	1	100
测量结果数量（个）	83	2330

四、标准编制原则和确定标准主要内容

本次制定以 2006 年以来国内外发布的相关指标水质标准检验方法、发表的文献资料及水质检验领域的新技术、新方法为基础，确定技术路线，从试剂的选择、使用要求、实验条件的选择等方面开展实验研究，建立检验方法。同时在全国范围内选择不同区域的10个单位开展方法验证，进一步确认方法的有效性和适用性。

（一）总体情况

本方法为定量盘法测定水中菌落总数

（二）编制依据

1.方法原理

使用基于复合酶底物技术的培养基，样品中特异性酶与培养基中的底物反应，在36℃±1℃下培养44h-48h后能够释放4-甲基伞形酮，4-甲基伞形酮在366nm紫外灯下发出蓝色荧光，对呈现蓝色荧光的97孔定量盘孔槽计数并查阅MPN表，可以确定原始水样中最大可能的菌落总数。本方法未稀释水样的最大检测浓度为2419.6MPN/mL或2419.6MPN/100mL。

2.方法适用范围

本方法适用于生活饮用水及其水源水、包装饮用水过程控制中菌落总数的检测。

3.确定本方法内容的依据

方法研制和验证单位如下（见表2）。

表2方法研制和验证单位

单位名称	单位类别
中国南水北调集团中线有限公司河北水质监测中心	方法验证单位
温州市自来水有限公司
唐山市润质检测技术服务有限公司
重庆城市供水水质监测网重庆中法供水水质监测站
石家庄市环境监控中心
河北金泓检测技术有限公司
石家庄市城市排水监测站
河北先达环保工程有限公司
河北诚乾建设有限公司
上海澄序生物科技有限公司
河北天工水韵环境检测技术有限公司	方法研制单位

3.1方法验证

3.1.1验证单位的选择

分别从位于全国不同地区选择了10公司对该方法进行验证，以检验此方法是否适用于全国各个地区，是否存在地区性差异。

3.1.2验证方案

分别采用检出限、标准样品（购于爱德士公司）、方法比对、不同厂家试剂验证来检验该方法的准确性。方法比对验证的水样来源为：包装饮用水、水源水（湖泊，溪流）、水厂出厂水、管网水、二次供水等，不限定水样类型，涉及水样种类越多越好。

1）检出限的验证

依据《食品安全国家标准微生物检验方法验证通则》GB 4789.45-2023，计算方法灵敏度。

配置浓度为0.5 MPN/mL、1 MPN/mL、2 MPN/mL、5 MPN/mL，每梯度20个平行样。同时做酶底物-定量盘法与酶底物法方法比对。

梯度配置明细

1、目标梯度与作用

编号	目标浓度MPN/mL	浓度相对灵敏度倍数	核心作用	预期检出率
1	0.5	0.5倍	验证低于灵敏度的假阴性	小于50%
2	1	1	核心验证梯度	用于计算RLOD
3	2	2	验证高于灵敏度的稳定检出能力	基本100%
4	5	5	验证高于灵敏度的稳定检出能力	基本100%
空白	-	-	验证培养基是否合格	-

2、分别用两种方法对四个梯度的样品进行检测。

浓度	检出率
浓度	酶底物法	酶底物定量盘法
0.5	0.2	0.15
1	0.4	0.5
2.0	1.0	0.95
5.0	1.0	1.0
空白	未检出	未检出

检测结果经配对分析后，RLOD值=0.73＜1.5满足GB4785.45-2023要求。

2）标准样品验证

选用菌落总数有证标准物质，采用酶底物-定量盘法进行检测（唐山市润质检测技术服务有限公司、石家庄市城市排水监测站、温州市自来水有限公司），检测结果见表3-表5。

表3唐山市润质检测技术服务有限公司

序号	酶底物-定量盘法测定值（MPN/mL)	有证标准物质240627（MPN/mL)
1	238.2	218（±27）
2	185.0
3	178.9
4	204.6
5	307.6
6	261.3
X	229.2	109-328

表4石家庄市城市排水监测站

序号	酶底物-定量盘法测定值（MPN/mL)	有证标准物质240627（MPN/mL)
1	260.3	218（±27）
2	214.2
3	290.9
4	204.6
5	209.8
6	195.6
X	229.2	109-328

表5温州市自来水有限公司

序号	酶底物-定量盘法测定值（MPN/mL)	有证标准物质240627（MPN/mL)
1	191.8	218（±27）
2	206.4
3	307.6
4	248.1
5	275.5
6	238.2
X	244.6	109-328

	唐山市润质检测技术服务有限公司	石家庄市城市排水监测站	温州市自来水有限公司
测定结果	229.2	229.2	244.6
真值	218
可接受范围	109-328
标准偏差	27

结论：三家不同的企业采用定量盘法测定菌落总数，平均结果均为优秀

注：质控结果在1倍的标准偏差内为优秀，2倍标准偏差为良好，可接受范围为合格。

3）高浓度样品的测定。

配制浓度为1090 MPN/mL的样品（取5只批号为240627的有证标准物质，按照作业指导书要求溶后定容到100 mL），测定10次，测定结果分别为

序号	结果（MPN/mL）	序号	结果（MPN/mL）
1	960.6	6	1011.2
2	1011.2	7	1011.2
3	1011.2	8	1011.2
4	1011.2	9	960.6
5	1011.2	10	1011.2

批号为240627的有证标准物质浓度为218（±27）MPN/mL，5只浓度范围为（995-1225）MPN/mL。酶底物-定量盘法测定结果均在此范围内。

4）方法比对实际样品（加标）的测定

采集样品151份，样品类型为包装饮用水加标、出厂水加标、地表水（库水、湖水、景观水）、地下水加标分别酶底物法和酶底物-定量盘法检测菌落总数（重庆城市供水水质监测网重庆中法供水水质监测站），检测结果见表8。

表8酶底物法和酶底物-定量盘法比对

序号	酶底物法（MPN/mL）	酶底物-定量盘法（MPN/mL）	序号	酶底物法（MPN/mL）	酶底物-定量盘法（MPN/mL）
1	355	172	26	202	547.5
2	355	170.1	27	231	613.1
3	398	135.4	28	223	547.5
4	738	193.5	29	257	410.6
5	339	209.8	30	216	613.1
6	276	279.5	31	137	290.9
7	392	186	32	209	261.3
8	324	261.3	33	231	198.9
9	339	224.7	34	223	248.9
10	509	178.9	35	216	260.3
11	231	209.8	36	209	218.7
12	311	235.9	37	189	198.9
13	239	273.5	38	248	222.4
14	324	273.5	39	183	206.4
15	287	325.5	40	202	272.3
16	257	290.9	41	177	517.4
17	372	325.5	42	177	190.4
18	257	344.1	43	93	225.4
19	324	290.9	44	161	210.5
20	339	344.8	45	146	177.7
21	414	579.4	46	132	203.5
22	414	579.4	47	156	154.1
23	440	365.4	48	90	249.5
24	287	512.7	49	183	178
25	324	613.1	50	151	196.8

对酶底物法和酶底物-定量盘法检测结果进行配对T检验，为了使数据呈正态分布，对数据进行对数处理后再进行配对T检验。由以上数据可知样品测定值经过计算，P=0.215，大于0.05，说明酶底物法和酶底物-定量盘法的结果无显著性差异，具有统计学意义。

5）不同厂家试剂结果比对

序号	厂家		序号	厂家
序号	IDEXX（MPN/mL）	RICKA（MPN/mL）	序号	IDEXX（MPN/mL）	RICKA（MPN/mL）
1	172	172.5	20	547.5	727
2	170.1	238.2	21	410.6	547.5
3	135.4	235.9	22	613.1	613.1
4	193.5	204.6	23	488.4	517.2
5	279.5	235.9	24	613.1	613.1
6	186	204.6	25	248.9	279.4
7	224.7	248.9	26	648.8	613.1
8	178.9	172.2	27	727.0	461.1
9	209.8	191.8	28	579.4	648.8
10	235.9	193.5	29	579.4	613.1
11	273.5	261.3	30	613.1	613.1
12	273.5	285.1	31	816.4	461.1
13	290.9	178.9	32	613.1	579.4
14	325.5	206.4	33	461.1	461.1
15	290.9	172.2	34	613.1	547.5
16	365.4	290.9	35	816.4	770.1
17	512.7	214.3	36	579.4	579.4
18	547.5	547.5	37	648.8	547.5
19	613.1	435.2

对爱德士和睿可试剂分别用酶底物-定量盘法检测结果进行配对T检验，为了使数据呈正态分布，对数据进行对数处理后再进行配对T检验。由以上数据可知样品测定值经过计算，P=0.101，大于0.05，说明两种试剂定量盘法的结果无显著性差异，具有统计学意义。

3.1.2验证结论

从以上检出限的验证、标准样品测定、方法比对、不同厂家试剂验证结果可知，酶底物法和酶底物-定量盘法测定生活饮用水及其水源水中菌落总数从方法学上满足测定要求，可以作为酶底物法的补充。

五、主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果

我国地域广大，水质类型复杂，本次标准制定的过程中，在不同地区选择了10个单位进行了方法验证。同时，考虑我国目前国情，部分地区经济条件以及技术条件有所差异，对方法的可行性和适用性均进行了充分考虑。

该检验方法与酶底物法相比，数据测定范围广，适应类型广，对水质检测及企业应急检测，提升安全风险防范能力具有重要意义。

通过本次制定，希望能够更好地满足各级检验机构的实际应用需求，作为国家标准的一个补充。

六、重大意见分歧的处理经过和依据

本标准在制定过程中未出现重大分歧意见。

附件3

团体标准征求意见反馈表

标准名称：《酶底物-定量盘法测定水中菌落总数》团体标准

填表人：单位名称（盖章）:

联系电话： Email：

联系地址：

序号	标准章条编号	意见内容	理由

（注：页面不够，可自行补充）

冀食协【2026】 15 号 关于《酶底物-定量盘法测定水中菌落总数》团体标准 公开征求意见的函

冀食协【2026】 15 号关于《酶底物-定量盘法测定水中菌落总数》团体标准公开征求意见的函